Пцр на вич качественный через 3 недели. Анализы на ВИЧ-инфекцию: особенности процедуры и расшифровка результатов. ПЦР в диагностике ВИЧ-инфекции

ПЦР на ВИЧ – один из самых информативных методов молекулярно-генетического диагностирования. Этот способ помогает выявить у пациента разного рода инфекционные недуги и заболевания, которые передаются по наследству. Этот же метод диагностики применим в случае проверки биоматериала на присутствие ВИЧ – тяжелого заболевания, развивающегося на протяжении всей жизни пациента. С медицинской помощью ПЦР оказалась в числе рекомендуемых анализов, проводимых на платной основе при подозрении на вирус иммунодефицита человека. Однако достоверность исследования оправдывает себя только в 80 из 100 случаев.

ПЦР диагностика на ВИЧ расшифровывается как полимеразная цепная реакция. Для исследования данного вида применяются различные типы биологических материалов. Среди них кровь, кроме этого может использоваться секреция из влагалища пациентки или семенная жидкость у мужчин.

Внимание! Слюна для ПЦР при диагностике ВИЧ не используется. Подобный подход признан неэффективным, поскольку в этом материале антитела к ВИЧ находятся в минимальной концентрации. Это же касается мочи, пота и слез.

Показанием к проведению описываемого исследования, является дважды положительный ИФА (иммуноферментный анализ). Об альтернативных назначениях речь пойдет позже.

Подробно о сути анализа

В основе анализа на ВИЧ методом ПЦР лежит возможность нуклеиновой кислоты самостоятельно репродуцироваться. Живые клетки состоят из белка и этих самых кислот, иначе говоря, из РНК и ДНК. Молекулы выступают в роли хранителей генетического кода.
При низкой концентрации вирусных частиц (ВИЧ) в биоматериале, проба включает не целые цепочки ДНК (дезоксирибонуклеиновой кислоты), а только их составляющие, называемые нуклеотидами. Анализ позволяет выявить даже незначительные остатки клеток вируса. Именно этим фактом объясняется способность ПЦР демонстрировать результат на ранних сроках – спустя несколько недель после заражения ВИЧ.

Наиболее качественных результатов от проведения полимеразной цепной реакции стоит ждать при исследовании венозной крови. Пробу расщепляют с помощью оборудования. Затем фракции подвергаются ферментной обработке. Реактивные вещества, объединившись с частицами вирусной ДНК, дублируют ее. Число таких элементов возрастает по принципу цепочки, пока их наличие (не антител) в крови пациента не станет заметно лаборантам. По точно такому же принципу не работает ни один из существующих способов диагностики.

Компоненты реакции

С помощью метода ПЦР можно заблаговременно узнать о развитии вируса в организме. Почему же его нельзя назвать популярным в области бесплатной медицины и делать повсеместно? Дело в том, что такой тест на ВИЧ весьма затратный и требует наличия следующих компонентов:

• матрица дезоксирибонуклеиновой кислоты, включающая отрезок ДНК, предназначенный для амплификации;
• два праймера (для каждого цепного отрезка);
• химически активный компонент полимераза для ускорения полимеризации вирусных частиц;
• дезоксирибонуклеозидтрифосфаты;
• частицы двухвалентного магния (заряженные);
• специальный раствор для создания благоприятных условий, обеспечивающий должный уровень кислотности, солевой концентрации, количества частиц магния в жидкости.

Внимание! Чтобы защитить образец от перегрева, в материал добавляют небольшое количество вазелина, который содержит жиры и, соответственно, высокую температуру кипения.

Относительно высокий показатель точности анализа объясняется его повышенной чувствительностью, которая стимулирует реакцию на антитела к прочим вирусам.

Преимущества и недостатки методики ПЦР при ВИЧ

Для объективной оценки метода в таблице ниже приведем ряд преимуществ и недостатков исследования:

Плюсы

Минусы

– достаточно высокий показатель точности (выявляет вирус в 80% случаев) – универсальность (для проведения исследования используют не только кровь, но и влагалищные выделения, сперму) – обширный спектр методики (одну пробу биологического материала можно проверить на несколько болезней) – скорость получения результата (пациент получает ответ на следующие сутки – более оперативны в этом плане экспресс-методы) – высокая чувствительность (возможна диагностика на ранних этапах развития ВИЧ, чего не скажешь об ИФА или общем анализе крови на инфекцию) – отсутствие возрастных ограничений (такой анализ крови на ВИЧ можно брать и у ребенка с момента его рождения)

– высокая цена – необходимость использования высокотехнологичного оборудования – 20 % получения ложноположительных результатов (по причине высокой чувствительности метода)

Очевидно, преимуществ методики больше. Если оценивать тип диагностики с точки зрения продуктивности дальнейшего лечения и возможности продления жизни пациенту, ПЦР – самый верный путь к успеху.

Особенности анализа

Основная особенность описываемого анализа состоит в его способности к ранней диагностики ВИЧ, на что не способны другие методы исследований. Через сколько дней после предполагаемого инфицирования можно сдавать кровь на ПЦР? Обычно этот временной промежуток составляет 10-14 дней. В течение следующих 24 часов пациент получает результат. Возможные отклонения в сроках объясняются индивидуальными условиями работы диагностических центров, клиник.

Назначение исследования

ПЦР в большинстве своем проводится в целях выявления ВИЧ (синдрома иммунодефицита человека). Однако анализ можно сдать и при подозрении на развитие заболеваний, которые передаются половым путем. Этот же метод применим и в случае диагностики наследственных болезней.

ПДР-диагностика: причины для проведения

Когда следует сдавать кровь на ПЦР? Биологический материал в большинстве случаев сдается, когда вирус иммунодефицита человека приспособился к условиям организма, простимулировал выработку антител и вызвал первые симптомы ВИЧ. Однако подобное оправдано лишь в случае истечения достаточного количества времени после заражения и предполагает проведение ИФА.

Необходимость же в ПЦР возникает по инициативе пациента, который желает оперативно диагностировать заболевание (если таковое имеет место быть). Причиной тому может быть: незащищенный половой акт, контакт с биологическим материалом инфицированного, недавнее переливание крови и пр.

Кому назначается ПЦР?

Определение инфекции ВИЧ при помощи ПЦР по рекомендации специалиста производят в следующих случаях:

• предварительное диагностирование. ПЦР безошибочно подтверждает или опровергает результат ИФА;
• иммуноблоттинг подтвердил диагноз . Иммунный блоттинг является дополнительным способом исследования СПИДа. Оба метода применяются совместно, что позволяет исключить вероятность постановки ошибочного диагноза;
• при подтвержденном ВИЧ-статусе с помощью ПЦР отслеживают эффект от проведения выбранного лечения;
• для анализа крови доноров на присутствие ВИЧ-антител;
• для определения ВИЧ-статуса у новорожденного, когда мать имеет положительный результат. ПЦР в первые дни жизни позволяет определить внутриутробное инфицирование или заражение младенца при прохождении по родовым путям. Тест проводится на 2 – 3 неделе после рождения.

Сколько времени делается анализ ПЦР, и где его можно сдать?

Анализ ПЦР на ВИЧ проводится в специальной лаборатории. Сам тест и трактовка результата не требует много времени: месяца и даже недели. Для взятия крови необходимо до 6 минут. В обычном случае специалисту, чтобы поставить диагноз и выдать заключение, потребуется не больше суток. Первые 8 часов происходит изучение крови, оставшееся время уходит на оформление. Результат можно будет забрать уже на следующий день после взятия пробы. Срок проведения экспресс-тестирования – 2 часа.

Внимание! Полис ОМС дает возможность прохождения теста бесплатно в государственном учреждении здравоохранения.

Почти любая коммерческая лаборатория способна провести исследование, причем, на анонимной основе. Человеку присваивают специальный номер, к которому затем привязывают результаты. Данная информация заливается на сайт учреждения в личный кабинет пользователя.

Сколько стоит сдать ПЦР-исследование?

Данный способ проведения исследований является достаточно дорогим. Связано это с тем, что проводить ПЦР необходимо на новейшем медицинском аппарате, манипуляция требует от специалистов достаточного багажа знаний.

Насущный вопрос: сколько же стоит человеку сдать анализ ПЦР на ВИЧ? Для этого потребуется в районе 56-60 долларов.

Проведение анализа

Проведение анализа ПЦР на ВИЧ предусматривает:

• забор крови на проведение исследование;
• дополнительный забор спермы у мужчины и половых выделений у женщины.

Внимание! В результате тест позволяет медикам определить высокую вирусную нагрузку для того, чтобы осуществлять контроль над состоянием больного.

Прочие особенности проведения этого анализа на ВИЧ, которые стоит принять во внимание:

• пару дней до теста пациенту следует снизить количество жирной пищи в рационе;
• забор крови производится на голодный желудок;
• к расщепленным биологическим материалам в особом реакторе добавляются ферменты, синтезирующие различные инфекции;
• анализ проводят в несколько этапов, т. к. деление молекул происходит в арифметической прогрессии. Специальная программа осуществляет сравнение большого количества клеточных структур для выявления ВИЧ.

Методы точной диагностики, к которым относится ПЦР, отличаются высокой стоимостью, но способны на ранних сроках выявить ВИЧ. В лечении подобных патологий самое главное – правильно и своевременно поставленный диагноз, который может улучшить качество жизни человека и ее продолжительность.

ПЦР (полимеразная цепная реакция) представляет собой метод молекулярной генетики, который позволяет анализировать любую короткую последовательность ДНК (или РНК) даже в образцах, содержащих только мельчайшие количества ДНК или РНК, тем самым определив наличие/отсутствие патогенного возбудителя (определить, например есть ли в человеке вирус ВИЧ или гепатита Б или микобактерии туберкулёза). ПЦР используется для воспроизведения/умножения/клонирования (амплификации) выбранных участков ДНК или РНК для анализа.

Метод ПЦР настолько прост, что его может поставить даже школьник)

Раньше амплификация ДНК включала клонирование сегментов, представляющих интерес, в векторы для экспрессии в бактериях и занимала недели. Но теперь, когда ПЦР делается в пробирках, требуется всего несколько часов . ПЦР является высокоэффективной , так что из ДНК может быть сделано огромное количество копий.

Последовательность ДНК и соответствие нуклеотидов.

Да не оскудеет рука дающего

Проект «СПИД.ВИЧ.ЗППП.» — некоммерческий, созданный добровольцами-экспертами в области ВИЧ/СПИДа за счет своих собственных средств, чтобы донести правду людям и быть чистыми перед своей профессиональной совестью. Будем благодарны за любую помощь проекту. Да воздастся Вам в тысячи крат: ПОЖЕРТВОВАТЬ .

Более того, ПЦР использует те же молекулы, которые природа использует для копирования ДНК:

• Два «праймера», коротких одноцепочечных последовательностей ДНК, которые синтезируются так, чтобы соответствовать началу и концу растяжения ДНК, подлежащей копированию.
• Фермент, называемый полимеразой, который перемещается вдоль сегмента ДНК, считывает его код и собирает копию.
• Куча блоков ДНК, которые необходимо сделать этой полимеразе.

То есть ПЦР — это такая техника при которой частицы ДНК (иногда РНК) умножаются в определенном растворе или на специальной поверхности, где они могут быть депонированы.

ПЦР — это метод, с помощью которого учёные могут находить иглу в стоге сена и затем строить стог из этих игл.

задача ПЦР как метода — умножить (амплифицировать), сделать как можно больше их копий, чтобы можно было идентифицировать кому они могут принадлежать (определенному человеку, животному или патогенному организму), даже если есть только следы наличия ДНК/РНК.

Однако ПЦР-амплификация является лишь частью диагностического теста. После проведения амплификации амплифицированные сегменты необходимо сравнить с другими нуклеотидными сегментами , но уже из известного источника (например, конкретного человека, животного или патогенного организма). Это сравнение уникальных сегментов часто выполняется путем размещения нуклеотидных последовательностей, сгенерированных ПЦР, рядом с известными нуклеотидными последовательностями от людей, патогенов или других источников в специальном геле.

Когда электрический ток проходит через гель, то различные нуклеотидные последовательности образуют полосы, которые напоминают «лестницу» в соответствии с их электрическим зарядом и молекулярным размером. Это называется гель-электрофорез. Они мигрируют на одни и те же уровни в геле, показывая идентичность нуклеотидных последовательностей. Этот метод является одним из самых популярных последних этапов ПЦР-тестов.

Как ПЦР работает?

В 1983 году Кари Муллис разработал основные этапы по амплификации ДНК-последовательностей. Он и Майкл Смит были удостоены Нобелевской премии за создание ПЦР в 1993 году.

ПЦР проводится в одной пробирке с соответствующими химическими веществами и при определенной температуре нагревания.

Необходимы следующие реагенты или химикаты:

• Образец, содержащий нуклеотидную последовательность (из крови, волос, гноя, кожи и т. д.).
• ДНК-праймеры: короткая одноцепочечная ДНК, которая присоединена к нуклеотидным последовательностям, которая способствует синтезу комплементарной цепи нуклеотидов.
• ДНК-полимераза: фермент, который, когда ДНК связывается с праймером, спускается по фрагменту ДНК с добавлением структурных блоков ДНК для образования комплементарных пар оснований и, таким образом, синтезирует комплементарную нуклеотидную цепь ДНК (введение термостойкой ДНК-полимеразы, Taq-полимеразы, полученной из термостойких бактерий, заметно улучшает способность к ПЦР).
• Большой избыток структурных блоков ДНК, называемых нуклеотидами (аденин, тимидин, цитозин и гуанин, сокращенные как: A, T, C и G соответственно) в растворе. Когда эти блоки соединены вместе, они образуют нуклеотидную последовательность или одну нить ДНК. Когда эти строительные блоки связывают свой комплементарный строительный блок слабыми водородными связями (например, A будет связываться только с T и G только с C) образуется комплементарная нуклеотидная последовательность ДНК, которая связана с исходной одноцепочечной ДНК. Когда связывание завершается, комплементарная ДНК с двойной цепью образуется в определенной последовательности.

Кари Муллис очень интересный, прикольный дядечка, посмотрите как он интересно рассказывает, как он придумал ПЦР:

Он верит в астрологию, но не верит, что ВИЧ вызывает СПИД.)

Затем полимеразно-цепная реакция начинается с сегмента ДНК из образца, который помещается в пробирку с указанными выше реагентами. Раствор нагревают до 94°С. Нагревание разрушает водородные связи, которые позволяют образовывать комплементарные цепи ДНК, поэтому в смеси существуют только одиночные нити (это называется денатурацией двухцепочечной ДНК).

Смеси дают остыть до 54°C. При этой температуре ДНК-праймеры и ДНК-полимераза связываются с отдельной одноцепочечной ДНК (это называется отжигом ДНК). Поскольку строительных блоки в избытке (высокая концентрация) в смеси, полимераза использует их для создания новых комплементарных нитей ДНК (называемых расширением ДНК), и этот процесс происходит быстрее при 72°C. Этот процесс создает новую двухцепочечную молекулу ДНК из каждой из одиночных нитей исходной молекулы.

Этот цикл повторяется примерно 40 раз в машине, называемой термическим циклером (термосайклером), который автоматически повторяет циклы нагрева-охлаждения, при этом количество каждой последовательности ДНК удваивается каждый раз, когда цикл нагрева-охлаждения завершается. То, что изначально было одним коротким сегментом ДНК, можно было увеличить до примерно 100 миллиардов копий после 40 циклов удвоения.

Когда необходим тест на ПЦР?

Тест на ПЦР является основой для ряда тестов, которые могут отвечать на многие различные медицинские вопросы, которые помогают врачам диагностировать и лечить пациентов. Например, тесты ПЦР могут обнаруживать и идентифицировать патогенные организмы у пациентов, особенно тех, которые трудно культивировать (например, ВИЧ и другие вирусы и некоторые грибы ).

Одни врачи назначают ПЦР-тесты, чтобы помочь диагностировать генетические заболевания , в то время как другие врачи используют ПЦР для обнаружения биологических родственных отношений, таких как идентификация родителей детей . ПЦР-тесты также используются для идентификации и характеристики генетических мутаций и перегруппировок, обнаруженных при определенных раковых заболеваниях .

Тем не менее, ПЦР-тесты были модифицированы и внедрены во многие аспекты научных исследований, включая эволюционную биологию, генетическую отпечатку пальцев, судебно-медицинские исследования и многие другие.

Что такое ОТ-ПЦР?

Обратно-транскриптазный ПЦР (RT-PCR) — это тест на ПЦР, который предназначен для обнаружения и измерения количества РНК. Хотя первоначальные тесты ПЦР амплифицировали ДНК, многие вирусы и другие биологические компоненты (например, митохондрии) используют РНК в качестве своего генетического материала. RT-PCR отличается от обычной ПЦР сначала взятием РНК и превращением нити РНК в нить ДНК. Это делается по существу тем же самым методом для ПЦР, описанным выше, за исключением использования фермента, называемого обратной транскриптазой, вместо ДНК-полимеразы.

Обратная транскриптаза позволяет перевести одну нить РНК в комплементарную цепь ДНК. Как только эта реакция происходит, рутинный метод ПЦР можно затем использовать для амплификации ДНК. RT-PCR используется для обнаружения и изучения многих РНК-вирусов. RT-PCR не следует путать с другим вариантом ПЦР, называемым ПЦР в реальном времени (реал-тайм).

ПЦР в реальном времени представляет собой вариацию ПЦР, которая позволяет анализировать амплифицированную ДНК в течение обычных 40 циклов процедуры. Хотя процедура аналогична обычной ПЦР с циклированием, ПЦР реального времени использует флуоресцентные красители, прикрепленные к некоторым из строительных блоков или небольших нуклеотидных нитей. В зависимости от используемого метода флуоресценция возникает, когда образуются амплифицированные нити ДНК. Количество флуоресценции можно измерить на протяжении 40 циклов и позволяет исследователям измерять определенные продукты и их количества во время циклов амплификации.

Это часто позволяет исследователям или техническим специалистам пропускать гель-электрофорез или другие вторичные процедуры, необходимые для анализа продуктов ПЦР, тем самым обеспечивая более быстрые результаты. ПЦР в реальном времени и RT-PCR являются вариациями или модификациями исходного теста ПЦР. Тем не менее, существует еще много вариантов (не менее 25), которые существуют и используются для решения конкретных проблем. Все они имеют разные названия, такие как сборка ПЦР, ПЦР с горячим началом, мультиплексная ПЦР, твердотельная ПЦР и многие другие.

Что такое ПЦР анализ на ВИЧ?

ПЦР (полимеразная цепная реакция) — метод умножения генетического материала вируса, анализ, который определяет генетический материал вируса — РНК или ДНК ВИЧ.

Если вирус содержится в минимальном значении, то в результате реакции это количество многократно увеличивается. Поэтому ПЦР имеет высокое диагностическое значение.

Обычно этот тест используется для определения ВИЧ в донорской крови или для раннего определения наличия ВИЧ в организме до выработки специфических антител к ВИЧ. Специфические антитела определяют обычные тесты на ВИЧ (ИФА), но только через 1-3, редко 12 месяцев после заражения. А с помощью ПЦР можно дать достаточно точный ответ через 14 дней с достоверностью 98% и даже через 5 дней, но тогда достоверность будет 80%. ПЦР на ВИЧ — это дорогой и более трудоемкий анализ, чем ИФА, поэтому его используют не всем подряд , а только по особым показаниям (доноры, пострадавшие от медицинской аварии с ВИЧ-инфицированным) или платно.

Качественный ПЦР анализ на ВИЧ — определяет есть вирус ВИЧ-1/ВИЧ-2 или его нет, но он не определяет количество копий вируса (для определения количества используется количественный ПЦР). Качественный ПЦР НЕ делают тем у кого известен диагноз «ВИЧ-инфекция». Его делают только тем, у кого пока неизвестно — инфицирован он ВИЧ или нет.

Это метод определения комплиментарного участка ДНК в геноме клетки лимфоцита пораженного ВИЧ. Т.е. определяется не сам вирус, а материал, который вирус встраивает в клетку. В ядре клетки уже будет храниться его ДНК из которой он потом будет считываться и размножаться (копировать самого себя).

Количественный ПЦР анализ на ВИЧ

Количественный ПЦР анализ на РНК ВИЧ — определяет количество копий РНК вируса в крови (для определения вируса в клетках используют ПЦР ДНК, например у детей). Делается только у ВИЧ-инфицированных , для контроля лечения, определения выраженности процесса развития болезни, эффективности лечения.

Через сколько времени после заражения можно обнаружить ВИЧ с помощью метода ПЦР?

Через сколько дней можно сдавать ПЦР на ВИЧ после контакта с ВИЧ положительным партнёром?

ВИЧ с помощью ПЦР можно обнаружить через 4-14 дней после заражения. Отрицательный результат ПЦР на ВИЧ достоверен после 14 дней после рискованного контакта, но по действующим нормативам всё равно требуется обследование с помощью .

Чем отличается ПЦР ДНК от ПЦР РНК ВИЧ?

РНК обычно используется в количественных тестах для оценки вирусной нагрузки у диагностированных лиц, например, для оценки эффективности терапии.

ДНК - в мононуклеарных клетках, например, для диагностики у детей, там, где антитела к ВИЧ матерей мешает использовать метод ИФА.

И тот и другой тест могут быть и количественными, и качественными.

И тот, и другой можно в особых случаях применить диагностики, но с учетом конкретных ограничений, которые накладывают технические параметры системы, т.е. по назначению врача.

Может ли ПЦР на ВИЧ быть ложноположительным, причины?

Если всё сделано правильно : медсестра не перепутала пробирки, посмотрела паспорт, прежде, чем делать забор крови, правильно промаркировала пробирку, правильно выписала направление и т.д., а специалист лаборатории (обычно это врач-лаборант) сделал всё согласно инструкции, им были соблюдены все требования лабораторного регламента (например, правильно «расскапал» биоматериал, без перекрестной контаминации (загрязнения) и т.д.) и была использована качественная тест-система, ТО ПЦР ложноположительным быть МОЖЕТ только в 2% случаях (это связано с чувствительностью используемых тест-систем) .

Но если были допущены ошибки со стороны персонала медицинского учреждения, ТО ПЦР может быть ложноположительным, более чем в 2% случаев.

Как сдается ПЦР на ВИЧ?

Для исследования на ВИЧ методом ПЦР сдаётся кровь из вены, желательно (но необязательно) утром натощак.

Где можно сдать анализы на ПЦР ВИЧ?

Для этого нужно ввести в поиск Вашего браузера «сдать пцр вич» и добавить в запрос Ваш населенный пункт и Вы увидите организации, которые занимаются у Вас исследованиями на ПЦР.

Например,

Сколько стоит анализ на ВИЧ методом ПЦР?

Около 1,5-3 тыс. руб. в зависимости от региона.

Какова достоверность результатов ПЦР анализа на ВИЧ?

Через 14 дней после заражения достоверность ПЦР на ВИЧ составляет 100%, с 4-5 дня — достоверность 80%.

Сколько времени делается анализ ПЦР на ВИЧ?

Технически 4-6 часов , но в реальности зависит от организации работы лаборатории и обычно результат выдается через 2-3 дня.

ПЦР на ВИЧ у новорожденного ребенка

Так как у ребёнка до 1,5 лет рожденного от ВИЧ+ матери сохраняются её антитела против ВИЧ, то определить заражен ВИЧ ребенок или нет с помощью ИФА невозможно. В такой ситуации используется ПЦР:

• Если у ребенка возрастом 1 мес с помощью ПЦР обнаружили вирус, значит он заразился.
• Если у ребенка в 1-2 месяца и 4-6 месяцев ПЦР отрицательная, то при условии, что мать не кормила его своим грудным молоком — ребёнок здоров.

В чём разница между ПЦР и ИФА?

ПЦР определяет сам вирус, а ИФА реакцию (в виде антител) организма на вирус.

ПЦР быстрее определяет наличие вируса, чем ИФА.

Новый алгоритм определения ВИЧ.

В последние годы большой популярностью стал пользоваться метод обнаружения генного материала ВИЧ методами репликации (амплификации, размножения) специфических генных последовательностей, часто объединяемых под названием одного из вариантов этого метода «полимеразная цепная реакция» (ПЦР).

В основе метода ПЦР (полимеразная цепная реакция) лежит уникальное свойство НК (как ДНК, так и РНК) - способность к саморепродукции, которая воспроизводится искусственно in vitro. При этом синтезируются только строго специфические фрагменты НК.

Этиологическим фактором ВИЧ-инфекции являются вирусы HIV-1 и HIV-2 (от англ. Human Immunodeficiency Viruses) из семейства Retroviridae. Патогенез ВИЧ-инфекции заключен в инфицировании вирусом клеток с фенотипом CD-4, присущий Т-лимфоцитам хелперам и некоторым другим клеткам организма человека. Прямое цитопатическое воздействие, оказываемое вирусом иммунодефицита на указанные клетки, в конечном итоге приводит к летальному исходу за счет активации оппортунистических инфекций или развития опухолей.

Лабораторная диагностика ВИЧ-инфекции проводится в трёх направлениях:

серологическая диагностика маркеров вируса методами иммуноферментного анализа и иммуноблотинга, заключающаяся в определении в сыворотки крови антигенов и антител против ВИЧ.

определение вирусной НК (провирусной-ДНК или РНК) методом ПЦР, как в крови, так и в клетках крови.

исследование иммунного статуса (количественная оценка CD-4 лимфоцитов), которая наиболее адекватно осуществляется методом проточной цитофлюориметрии.

Особо необходимо отметить значение ПЦР в диагностике ВИЧ-инфекции у детей первого года жизни. Ранняя диагностика ВИЧ-инфекции у детей этого возраста в принципе невозможна без применения ПЦР. Это обусловлено тем, что ребёнок, родившийся от ВИЧ-инфицированной матери обязательно имеет антитела к вирусу иммунодефицита. Различить материнские и собственные антитела к ВИЧ не представляется возможным. У неинфицированного ребёнка данные антитела элиминируются под влиянием собственной иммунной системой к возрасту 6-9 месяцев, хотя в отдельных случаях могут циркулировать до 18 месяцев жизни, но не более этого срока.

Необходимо отметить, что обследование методом ПЦР имеет смысл только при полном отказе от грудного вскармливания ребёнка ВИЧ-позитивной матерью с момента рождения, т.к. риск заражения довольно высок и составляет около 5%.

Таким образом, ПЦР позволяет проводить дифференциальную диагностику ВИЧ-статуса у детей раннего возраста. Так, если имеет место положительный результат ПЦР на НК вируса иммунодефицита в первые 48 часов жизни, то ВИЧ-инфицирование произошло in utero. Если имеет место отрицательный результат ПЦР в первые 48 часов, но становится положительным в возрасте 7 – 14 дней жизни, то инфицирование произошло intrapartum.

В настоящее время ПЦР позволяет осуществлять не только диагностику, но и мониторинг лечения ВИЧ-инфекции путем определения концентрации РНК в плазме, а также выявления резистентных к химиотерапии штаммов вируса иммунодефицита. Определение “вирусной нагрузки” в плазме крови является наилучшим прогностическим критерием течения ВИЧ-инфекции и оценки эффективности антиретровирусной терапии.

Известные модификации ПЦР для диагностики ВИЧ-инфекции достигают чувствительности лишь в 98%, то есть выявляют лишь 98% проб от ВИЧ инфицированных лиц, что существенно ниже, чем при использовании ИФА (до 99,9%). По этой причине они не могут использоваться и как подтверждающие тесты, так как будут давать заведомо больше ложноотрицательных результатов, чем иммуноблот. Методика ПЦР на практике ведет себя как чересчур «чувствительная» к внешним колебаниям, и в неумелых руках, и в недостаточно хорошо оборудованных лабораторных условиях дает немалое количество неспецифических (ложноположительных) реакций. Специфичность ПЦР также зависит от подбора используемых в ней ингредиентов, в особенности, так называемых «праймеров», которые должны имитировать «генные последовательности ВИЧ», но далеко не всегда могут быть точно подобраны. Неудачный подбор может приводить, в частности, к тому, что такие тесты могут с разным успехом выявлять разные субтипы ВИЧ-1, например, выявлять субтип B и не выявлять субтип A и G т.п. Впрочем, разработка этих методик идет быстрыми темпами и не исключено скорое появление более качественных наборов стандартных реактивов. На практике врачи должны учитывать операционные характеристики предлагаемых им диагностических тестов, изначально предполагая, что их полевая (практическая) ценность может быть существенно ниже заявляемой производителями.

Теоретическое преимущество ПЦР состоит в том, что она способна выявлять ВИЧ-инфекцию в инкубационном и раннем клиническом периоде, когда антител еще может не быть. Однако, она пока не всегда может выявлять инфицированных в более позднем периоде инфекции. Это в будущем, возможно, будет иметь значение и при попытке диагностики ВИЧ-инфекции у лиц, получающих противоретровирусную терапию, когда уровень ВИЧ в крови значительно снижается. Совместное использование двух методик, которое могло бы быть выходом из создавшейся ситуации - ИФА и ПЦР, к сожалению, сделает исследования значительно дороже, тем более, если они осуществляются в массовом масштабе.

Обнаружение ВИЧ методом ПЦР в крови возможно в двух вариантах:

Обнаружение ДНК провируса ВИЧ в мононуклеарных клетках периферической крови;

Обнаружение РНК ВИЧ в биологических жидкостях организма (например, в плазме или сыворотке крови).

Сейчас ПЦР на ДНК провируса ВИЧ используется как диагностическая методика для прямой диагностики ВИЧ-инфекции в следующих случаях:

В период серологического "окна". Хотя следует помнить! что чувствительность ПЦР на провирусную ДНК ВИЧ колеблется от 96 до 99%, в связи с чем, несмотря на высокие показатели чувствительности, ПЦР следует проводить или совместно с ИФА или с последующим подтверждением ИФА;

В случае сомнительного результата ИБ;

При обследовании детей, родившихся от ВИЧ-инфицированных матерей. Использование ПЦР в этом случае позволяет сократить сроки постановки диагноза ВИЧ-инфекции с 18 месяцев до 3-6 месяцев.

Одним из наиболее точных и достоверных методов молекулярно — генетической диагностики считается ПЦР, то есть полимеразная цепная реакция. Такой метод позволяет диагностировать у пациента различные виды заболеваний наследственного и инфекционного характера.

ПЦР — исследование позволяет диагностировать одно из таких сложных заболеваний, как , которое трудно поддается лечения. Достоверность ПЦР на ВИЧ оправдывает себя лишь в 80 случаях из 100.

Основным способов диагностики ВИЧ-инфекции в организме человека считается его крови, то есть проводиться тестирование на это заболевание. Самым простым и привычным способом диагностики является взятие венозной крови и проведение ее в специальной лаборатории. Конечно, полученный положительный результат может быть ложным, поэтому проводится его перепроверка более точным исследовательским способом в референц -лаборатории.

Полимеразная цепная реакция на считается довольно дорогостоящей процедурой, и ее проведение требует наличия специального оборудования и высококвалифицированных специалистов. Именно по этой причине она не получила широкого распространения среди населения.

Применение ПЦР-анализа для диагностики ВИЧ позволяет получить точный и достоверный результат о наличии заболевания, однако, часто это зависит от подготовки самого пациента.

ПЦР-анализ проводиться в следующих случаях:

1. Диагностирование ВИЧ-инфекции у новорожденных детей, которые появились на свет от матери, зараженной СПИДОМ.
2. С целью контроля концентрации ВИЧ в крови пациента
3. Ссследование крови донора.

Даже в том случае, если ПЦР-исследование покажет положительный результат, то диагноз только по такому тесту не ставится. Чаще всего его используют в качестве дополнительного метода для разрешения спорных ситуаций.

ПЦР-анализ, к сожалению, нельзя назвать универсальным методом , проведение которого дает точные результаты на наличие либо отсутствие инфекции в организме человека. Это связано с тем, что именно такой вид исследования чаще других методов дает ложноположительные результаты. К такому методу диагностики прибегают при постановке диагноза заболевания либо при проведении на ВИЧ-инфекцию. Преимущественно его используют как вспомогательный метод диагностирования вируса СПИДа.

Однако, несмотря на вероятность ложноположительного результата, такое исследование на ВИЧ имеет ряд преимуществ перед другими методами диагностики. Проводить ПЦР–анализ можно уже на 11-15 день после даты предполагаемого заражения, а все остальные методы позволяют оценить наличие вируса СПИДа в организме человека лишь через длительный промежуток времени. Такая разбежка объясняется тем, что большинство скрининг тестов на ВИЧ основываются на определении к вирусу, образование которых происходит в течение трех месяцев.

Главным отличием ПЦР-исследования от остальных методов диагностики считается тот факт, что он выявляет не к вирусу, а наличие самого вируса в организме пациента.

Именно по этой причине метод полимерную цепную реакцию можно назвать идеальной в том случае, если имеется необходимость проведения преждевременного выявления . Кроме этого, прибегнуть к проведению такого метода можно в том случае, когда наличие антител не может являться достоверным показателем.

Больше информации о исследованиях на ВИЧ можно узнать из видео.

При необходимости выявления степени либо тяжести патологии в организме человека прибегают к проведению ПЦР-исследования количественным способом. Именно он позволяет получить информацию об уровне концентрации инфекции в организме больного. Прогрессирование болезни сопровождается постепенным увеличением концентрации вируса и количественная ПЦР-диагностика позволяет определить стадию инфекции и эффективность проводимого . Диагностирование «вирусной нагрузки» до выявления болезни и после проведения лечения позволяет сделать заключение о том, насколько эффективно проводиться лечение.

Другие методы диагностики на ВИЧ

На сегодняшний день диагностика ВИЧ-инфекции является стандартной процедурой, которая предполагает применение различных видов диагностики:

ИФА тест-системы

Проведение такого скринингового теста позволяет выявить вирус уже через несколько недель после его проникновения в организм человека. Такое исследование направлено не на определение присутствия вируса у пациента, а на диагностировании выработки антител к нему. Выделяется несколько поколений ИФА-тестов, каждая из которых имеет разную чувствительность. Такой тест иногда дает результаты, что объясняется неправильным проведением обработки и наличием в организме пациента различных видов патологий.

Иммунный блоттинг

В том случае, если иммунный блоттинг показывает положительный результат, то можно говорить о постановке окончательного диагноза ВИЧ. Основным способом его проведения является использование нироцеллюлозной полоски, на которую нанесены белки вирусного происхождения.

Экспресс-методы

Такой считается новинкой в области диагностирования ВИЧ-инфекции и оценивать результат можно уже через несколько минут после их проведения. Наиболее точные и достоверные результаты дают иммунохроматографичесие тесты, применение которых основывается на принципе капиллярного тока.

Говорить о наличии в организме ВИЧ–инфекции можно только после подтверждения тестов ИФА анализом ИБ.

Диагностирование ВИЧ-инфекции в организме человека вносит существенные изменения в его привычный образ жизни и отношения с окружающими. Обязанностью медицинского персонала является сохранение результатов анализов, и только сам пациент принимает решение о том, кому сообщить о своем заболевании. ПЦР — является одним из диагностических методов, позволяющих выявить присутствие вируса в организме человека всего за несколько недель.

.

ВИЧ-инфекция - тяжелое вирусное заболевание с длительным бессимптомным периодом, характеризующееся поражением иммунной системы человека и опасное своей поздней диагностикой. Часто термины «ВИЧ» и «СПИД» употребляются как синонимы, фактически же СПИД является терминальной (последней) стадией ВИЧ-инфекции, длительность которой составляет 1-2 года. По данным исследований, с момента инфицирования до вступления болезни в терминальную стадию при отсутствии лечения, в среднем, проходит 9-11 лет. Ранняя диагностика заболевания методом ИФА или ПЦР анализа на ВИЧ позволяет своевременно начать антиретровирусную терапию, остановить прогрессирование болезни и долгие годы вести полноценную жизнь, несмотря на присутствие вируса иммунодефицита человека в организме.

Пути передачи ВИЧ:

• незащищенные половые контакты;
• переливание крови и препаратов крови;
• использование нестерильных инструментов при проведении медицинских вмешательств;
• ранения медперсонала нестерильным инструментом;
• перинатальное инфицирование: передача вируса во время беременности и родов.

Анализы на СПИД (ВИЧ) назначают:

• при случайном половом контакте;
• при планировании беременности и во время беременности;
• при подготовке к госпитализации;
• при резком снижении веса;
• при длительном повышении температуры тела неясного генеза.

Экспресс анализ крови на ВИЧ

ВИЧ относится к семейству ретровирусов (Retroviridae), подсемейству лентивирусов (Lentivirus). Попадая в организм человека, он поражает клетки иммунной системы Т-хелперы, макрофаги, дендритные клетки. Ретровирус трансформирует свою РНК в участок ДНК, который встраивается в геном клетки-хозяина. При делении пораженной клетки дочерние получают вирусный геном. К антигенам вируса на поверхности зараженных клеток в организме вырабатываются антитела, на выявлении которых основана диагностика ВИЧ-инфекции по методу иммуноферментного анализа (ИФА). Сдавать анализ рекомендуется через 1,5 - 3 месяца после момента предполагаемого заражения, ранее тест ИФА не информативен. Лаборатория Гемотест использует альтернативный метод Real-Time ПЦР (ПЦР с детекцией продуктов в режиме реального времени), обнаруживающий не антитела к ВИЧ, а сам вирус в организме. Обладая высокой чувствительностью и достоверностью, метод позволяет выявлять даже единичные частицы вируса уже через 10 дней (средний показатель) с момента потенциального заражения, когда антитела в крови еще отсутствуют.

• для выявления вируса в период «серонегативного окна»;
• при сомнительном результате иммуноблота;
• для определения генотипа вируса - ВИЧ-1 или ВИЧ-2;
• для контроля вирусной нагрузки на организм;
• для определения ВИЧ-статуса новорожденных, если мать ВИЧ-инфицированна;
• после переливания крови.

Анонимный анализ на ВИЧ

Согласно п.2, ст.8 ФЗ РФ № 38-ФЗ, пациент может анонимно сдать анализ на ВИЧ и получить результат по индивидуальному номеру заказа, не подлежащему разглашению. Тем, кто по каким-либо причинам не имеет возможности приехать на обследование в одно из отделений Лаборатории Гемотест, мы рекомендуем воспользоваться услугой по выезду медсестры для взятия крови с последующей регистрацией взятой пробы как анонимного заказа.

Обращаем Ваше внимание: результаты анонимных анализов на СПИД (ВИЧ) не могут быть использованы для профессиональных осмотров, госпитализации или предоставления лечащему врачу в поликлинике.

Результаты исследования на ВИЧ независимо от их результата выдаются только при личном обращении пациента в лабораторное отделение. При обследовании несовершеннолетних (до 14 лет) детей - законному представителю, указанному в заказе.

Результаты выдаются при предъявлении договора, сметы и документа, удостоверяющего личность самого пациента или представителя пациента, указанного в заказе.

По телефону и электронной почте результаты исследований не сообщаются.

ЕСЛИ АНАЛИЗ НА ВИЧ НАЗНАЧЕН В ЦЕЛЯХ ПОДГОТОВКИ К ГОСПИТАЛИЗАЦИИ ИЛИ ДЛЯ ПРЕДОСТАВЛЕНИЯ В ЛПУ, РЕГИСТРАЦИЯ ЗАЯВОК НА ЕГО ПРОВЕДЕНИЕ ОСУЩЕСТВЛЯЕТСЯ при обязательном предоставлении пациентом следующих данных:

1) Для жителей Москвы и Московской области

• Фамилия, имя, отчество
• День, месяц и год рождения
• Сведения о регистрации
• Паспорт
• Страховой полис (серия и номер страхового полиса, наименование страховой компании).

2) Для жителей других регионов РФ и иностранных граждан дополнительно – ксерокопию (скан) паспорта.

• Фамилия, имя, отчество
• День, месяц и год рождения
• Сведения о регистрации
• Страховой полис (серия и номер страхового полиса, наименование страховой компании)
• Ксерокопия (скан) паспорта

Сколько делают анализы на ВИЧ?

Результаты теста ИФА можно получить через 1 рабочий день, но не ранее 1,5-3 месяцев с момента предполагаемого заражения, результат ПЦР-диагностики можно узнать уже через 10 дней с момента предполагаемого заражения. Срок исполнения теста по методу Real-Time ПЦР составляет 3 рабочих дней.